大蒜油研究新突破：氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析揭示其特殊成分！
測式條件的分析：
載氣：氦氣，41 cm/sec,45攝氏度測定
柱箱溫度：45攝氏度，保持3min,
45-240攝氏度,5攝氏度/min,
240攝氏度保持3min
進樣方式：熱柱上進樣，100攝氏度，
108ml/min分流出口流量
1.2ul二氯甲烷，再吸入含1.0mg/ml大蒜油樣品
的二氯甲烷溶液1.2ul進樣
檢測器：MSD，200攝氏度傳輸線，全掃描35-215amu
氣相色譜柱：DB-XLB
30m柱長x0.25mm內(nèi)徑0.5um膜厚
部件號：122-1236
建議使用下列消耗品：
襯管： 單錐型，低壓，5183-4647
隔墊：綠色，5183-4759
密封墊：鑲金，18740-20885
注射器：5納升,23-26s/42/HP,錐型，固定式，5181-1273
GC5890N 全數(shù)字高效氣相色譜儀
GC5890N 全數(shù)字高效氣相色譜儀可選配多種檢測器及填充柱、分流 不分流毛細管柱進樣系統(tǒng)；全兼容安捷倫 6890N 氣相色譜儀檢測器及相關(guān)檢測器控制板、色譜工作站和自動進樣器。性價比卓越，性能優(yōu)良，運行穩(wěn)定可靠。
血栓性疾病包括動脈粥樣硬化、動脈血栓形成和深靜脈血栓形成，越來越多的患者受此類疾病的困擾。止血作為有效的生理防御機制能夠保證血液在循環(huán)中正常流動，而止血障礙會加速血栓的形成。除了血小板和凝血因子，凝血酶的激活和抑制在止血中也發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。凝血酶是一種損傷處血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的多功能蛋白酶，它參與凝血過程中各個關(guān)鍵性環(huán)節(jié)，主要將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白，并與后者交聯(lián)形成血栓。
目前，抗凝血研究通常圍繞內(nèi)源性抗凝血途徑（活化時間凝血酶時間（APTT））、外源性抗凝血途徑（凝血酶原時間（PT））、共同抗凝血途徑（凝血酶時間（TT））以及降低纖維蛋白原（FIB）開展。
目前常用的抗凝血藥物可能會帶來出血等健康風(fēng)險。因此，尋找安全有效的抗凝血成分一直是人們關(guān)注的焦點。最新的研究表明大蒜苗能夠通過改變APTT、PT、TT、FIB含量而發(fā)揮抗凝血作用，揭示了蔥屬抗凝血活性的潛能。
沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院的周麗麗、朱艷雯、白 冰*等人從大蒜中分離提取大蒜油，通過紫外光譜、分子熒光光譜、動力學(xué)分析等探究大蒜油及其主要成分的抗凝血作用，旨在為大蒜油抗凝血功能的研究提供參考。
1、大蒜油氣相色譜質(zhì)-譜聯(lián)用分析結(jié)果
如圖1所示，大蒜油分別在6.5、8.5、10.3 min處存在3 個色譜峰，經(jīng)面積歸一化分析，總硫醚含量大于90%。定性分析可以看出，質(zhì)荷比（m/z）41、73、114、146、178是主要碎片。m/z 114（M a ）、m/z 146（M b ）和m/z 178（M c ）分別為DAS（C 6 H 10 S，114.21）、DADS（C 6 H 10 S 2 ，146.26）和DATS（C 6 H 10 S 3 ，178.33）的分子離子碎片。m/z 41（對應(yīng)CH 2 ＝CH-CH 2 -）和m/z 73（對應(yīng)CH 2 ＝CH-CH 2 -S-）是以上3 種物質(zhì)的共有碎片。
2、大蒜油、DAS、DADS、DATS對凝血酶活性的影響
如圖2所示，本研究利用大蒜油、DAS、DADS、DATS與凝血酶進行相互作用后檢測凝血酶活性的變化，不同濃度硫化物對凝血酶活性有部分抑制作用，且存在濃度依賴關(guān)系，濃度越高，活性抑制越強。進一步以DAS、DADS、DATS與凝血酶作用，1～5 mmol/L濃度范圍均對酶活性起到部分抑制效果，其中DATS作用最強，DADS次之，DAS最弱（圖2B～D）。
3、酶動力學(xué)分析結(jié)果
結(jié)果如圖3所示，經(jīng)DAS、DADS、DATS處理的凝血酶，V max 和K m 同時發(fā)生變化，將直線交點不在橫坐標(biāo)軸上和縱坐標(biāo)軸上的情況判定為混合型抑制（或共同型抑制），說明該抑制作用屬于競爭性和非競爭性的共同型抑制。這意味兩種作用方式產(chǎn)生抑制：即與底物競爭酶結(jié)合部位方式以及與酶的非活性部位結(jié)合形成抑制物-酶復(fù)合物的方式，不影響酶與底物的再次結(jié)合。
4、大鼠體內(nèi)實驗分析結(jié)果
凝血四項指標(biāo)分析結(jié)果
如表1所示，與空白組相比，大蒜油、DAS、DADS、DATS處理組的PT、APTT和TT均出現(xiàn)顯著增高的趨勢，其中DATS組極顯著升高（P＜0.01），說明大蒜油、DAS、DADS、DATS均是通過改變內(nèi)源性（APTT）、外源性（PT）、共同凝血途徑（TT）凝血系統(tǒng)而起到抗凝作用；大蒜油、DAS、DADS、DATS組FIB質(zhì)量濃度極顯著下降，分別從（2.13±0.66）g/L降低至（1.48±0.23）、（1.54±0.48）、（1.31±0.35）、（1.16±0.13）g/L，說明大蒜油、DAS、DADS和DATS干預(yù)可以降低大鼠血液FIB含量從而發(fā)揮抗凝血活性。
抗氧化與抗凝血能力
如圖5所示，大蒜油、DAS、DADS、DATS處理組的GSH、GR、TP、T-AOC水平均比空白組略有升高，但都不具有顯著性差異（P＞0.05）。這說明大蒜油、DAS、DADS、DATS只有微弱的抗氧化能力，與大蒜油、DAS、DADS、DATS具有顯著抗凝血能力的結(jié)果并不一致。因此，本實驗所揭示的大蒜油、DAS、DADS、DATS抗凝血能力應(yīng)該與其抗氧化能力無關(guān)。
結(jié) 論
本研究通過體內(nèi)和體外實驗探索了大蒜油、DAS、DADS、DATS的抗凝血功能，紫外光譜、分子熒光光譜、動力學(xué)分析結(jié)果表明DAS、DADS、DATS對凝血酶的抑制作用屬于競爭性/非競爭的共同抑制效果；二維、三維分子對接分析結(jié)果表明抑制屬競爭性和非競爭抑制并存的作用方式；大鼠凝血四項的結(jié)果從體內(nèi)的角度印證了大蒜油、DAS、DADS、DATS具有抗凝血功能；大鼠抗氧化實驗結(jié)果提示大蒜硫醚類抗凝血功能應(yīng)與抗氧化能力不相關(guān)。
